技術(shù)參數(shù)
產(chǎn)品描述
【摘要】
本試劑盒用于體外定性檢測人咽拭子樣本中的的甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒及肺炎支原體核酸，高靈敏度和特異性的核酸檢測可一次檢測多種病毒，全程檢測時間約1小時，可實現(xiàn)對呼吸道感染病的早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早報告和早治療，及早為臨床提供準(zhǔn)確的診療和感染防控依據(jù)。
【檢驗原理】
六項呼吸道病原體核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)采用Taqman熒光探針法，針對甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒及肺炎支原體的高度保守且特異性區(qū)域，設(shè)計熒光檢測的引物探針，采用不同的熒光基團(tuán)進(jìn)行標(biāo)記，檢測過程中的核酸經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，在擴(kuò)增過程中，特異性引物和探針與靶序列結(jié)合，通過Taq酶的DNA聚合酶活性和5’-3’外切酶活性實現(xiàn)PCR產(chǎn)物形成與熒光信號累積完全同步;通過檢測不同熒光基團(tuán)信號實現(xiàn)對樣本中甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒及肺炎支原體核酸的定性檢測。
試劑盒含有內(nèi)參設(shè)置，作為對試劑、核酸質(zhì)量以及操作本身的質(zhì)控，避免檢測結(jié)果假陰性。
【檢驗方法】
1. 試劑準(zhǔn)備
1.1. 取出試劑盒中反應(yīng)buffer及引物探針Mix，室溫放置，待完全融解后，振蕩混勻，離心備用;取出試劑盒中的檢測酶液，離心后備用。
1.2. 根據(jù)需準(zhǔn)備樣品數(shù)N(N=樣本數(shù)+1管陽性質(zhì)控品+1管陰性質(zhì)控品)配制PCR-Mix，向熒光定量PCR八聯(lián)反應(yīng)管中分裝每孔20μL PCR-Mix，用畢反應(yīng)buffer、引物探針Mix和檢測酶液立即放入-18℃以下凍存。
2. 樣本處理
樣本收到后先采用水浴鍋56℃30min進(jìn)行滅活。
提取采集的咽拭子樣本，應(yīng)保證RNA滿足實驗需要的RNA數(shù)量，提取的RNA樣品立即檢測或于-70℃以下保存(不超過7天);同時取相應(yīng)體積的陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品進(jìn)行提取。
3. 加樣
在所設(shè)定好的每個反應(yīng)管中分別依次加入步驟2中提取的陰性質(zhì)控品提取RNA、陽性質(zhì)控品提取RNA、待測樣本RNA，各10µL，蓋緊管蓋，簡短離心。
4.實時擴(kuò)增(詳見說明書)
4.1儀器通道及反應(yīng)體積選擇
4.2實時擴(kuò)增條件設(shè)定
5.結(jié)果分析
【檢測方法及檢驗結(jié)果解釋詳見說明書】
【質(zhì)量控制】
技術(shù)參數(shù)
| 檢測原理 | PCR-熒光探針法 | 適用機(jī)型 | ABI 7500、宏石SLAN-96P |
| 樣本類型 | 咽拭子 | 包裝規(guī)格 | 50 人份/盒 |
| 檢測時間 | 約1小時 | 有效期 | 9個月 |
| 儲存條件 | -18℃以下避光保存 |
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